@article{oai:otemae.repo.nii.ac.jp:02000046,
 author = {南森, 隆司 and 川端, 愛 and 柏尾, 尚宏 and 櫻井, 厚司 and 松岡, 大介 and 久保, 雄昭 and 松田, 吉弘},
 journal = {食糧・栄養と健康, Otemae Journal for Food, Nutrition & Health},
 month = {Mar},
 note = {Chlamydomonas は植物の起源といわれる単細胞緑藻であるが、鞭毛をもち動物的要素もとどめている。この研究では、Chlamydomonas を材料にして、動物細胞に広く存在するが高等植物には認められていない情報伝達分子のA-キナーゼ（PKA）、G-キナーゼ（PKG）、C-キナーゼ（PKC）などAGC系プロテインキナーゼの検索を行った。プロテインキナーゼドメインに広く保存されているサブドメインのアミノ酸配列に対するミックスプライマーを作成し、RT-PCRによりえられたキナーゼドメインの断片（PK1）をプローブとし、ｃDNAライブラリーからCPK1断片を得た。さらにこのCPK1断片配列と100％（CPK1）、66％（CPK2）一致するESTクローンの挿入部位の全塩基配列を決定した。その結果、両キナーゼ遺伝子は、それぞれのＮ末端側にPKGの調節領域を、Ｃ末端側にはPKGの触媒領域（キナーゼ領域）をコードしていた。それぞれの発現解析の結果、CPK1は、栄養体細胞で発現し、CPK2は、配偶体での発現が確認された。さらに、FLAGタグを付加したCPK1タンパク質を回収し、活性を調べたところ、プロテインキナーゼCPK1は、PKGの一般的な基質ペプチド（BPDEtide）に対して、cGMP存在下でフルアクティビティを示したことから、Chlamydomonas の栄養細胞で発現しているcGMP依存性タンパク質キナーゼ（PKG）である。植物細胞の起源と考えられているこの緑藻には、高等植物や真菌類（Fungi）には存在しない動物型のPKGが機能していることが判明した。, Chlamydomonas belonging to a unicellular green alga seems to be one of the origin cells toward Plants. In this study, using Chlamydomonas as a material, we investigated signaling molecules such as A-kinase (PKA), G-kinase (PKG), and C-kinase (PKC) that are widely present in animal cells but not recognized in higher plants. A cDNA fragment (designated as PK1) was amplified from Chlamydomonas by RT-PCR using a set of oligonucleotide primers, corresponding to the conserved amino acid sequences of animal-type AGC kinases. A Chlamydomonas cDNA library was screened with the PCR-amplified fragment as a probe, we identified a partial sequence of PKA -like protein kinase gene (designated as partial CPK1). Furthermore, two open-reading frames of the protein kinase genes were obtained by the database analysis of Chlamydomonas EST libraries. Nucleotide sequence of each protein kinase has 100% or 66% similarities with the partial CPK1, respectively. These two protein kinase genes designated CPK1 and CPK2 , encode both regulatory domains of PKG in their N terminal region and catalytic domains of PKG in their C terminus. CPK1 gene was expressed in vegetative cells of Chlamydomonas , whereas, CPK2 gene was expressed in gamete cells. FLAG-tagged CPK1 expressed in E.coli were harvested by immunoprecipitation using anti-FLAG antibody. The immunoprecipitates reacted with three kinds of protein kinase substrates under cAMP or cGMP. As a result, CPK1 phosphorylates most strongly the PKG specific substrate (BPDE tide) under the presence of cGMP. These results suggest that CPK1 is a typical PKG and functions in vegetative cells of Chlamydomonas . Here we demonstrate animal type PKG in Chlamydomonas , a possible origin of Plants.},
 pages = {1--7},
 title = {緑藻クラミドモナスChlamydomonas reinhardtiiのサイクリックGMP依存性タンパク質リン酸化酵素（PKG）の特徴},
 volume = {3},
 year = {2023},
 yomi = {ナンモリ, タカシ and カワバタ, ウイ and カシオ, ナオヒロ and サクライ, アツシ and マツオカ, ダイスケ and クボ, タケアキ and マツダ, ヨシヒロ}
}